生物学论文_肝素结合蛋白单克隆抗体制备及应用
文章摘要:[目的]制备抗肝素结合蛋白（HBP）单克隆抗体，并应用抗体构建HBP磁微粒化学发光（CLIA）检测方法。[方法]采用细胞融合技术制备抗体、间接ELISA法测定效价、SDS-PAGE测定抗体纯度、分子互作仪测定亲和力，通过分子互作仪筛选抗体配对，建立磁微粒化学发光检测方法，并对其灵敏度、特异性等分析性能进行评估。[结果]获得7株稳定分泌抗体的细胞株，其分泌的抗体效价均达到1×10-5mg/m L，纯度达到90%，亲和力达10-9M。所构建的CLIA最低检测限为4.74 ng/m L，低、中、高浓度样本的添加回收率为100.78%、99.03%、98.58%，低、中、高值样本检测的变异系数（CV）均小于5%，与降钙素原、C反应蛋白、血清淀粉样蛋白A无交叉反应，血红蛋白、胆红素、甘油三脂对检测无干扰。[结论]成功制备了抗人HBP单克隆抗体，并建立了精密度高、灵敏度好、特异性高的HBP磁微粒化学发光检测体系。
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